破壁机在胞内分枝杆菌破壁制备上的应用

引言：分枝杆菌属（ Mycobacterium）是一类细长略弯曲的杆菌，因有分枝生长的趋势而得名。细胞壁含有大量脂质，主要是分枝菌酸，一般不易着色，若经加温或延长染色时间而着色后能抵抗强脱色剂盐酸乙醇的脱色，故又称抗酸杆菌，且不易破壁。本次实验ATS破壁机将样品做两部分处理，对比破壁结果。

实验对象 
胞内分枝杆菌

实验仪器
高速离心机
ATS破壁机
显微镜

实验背景
分枝杆菌属（ Mycobacterium）是一类细长略弯曲的杆菌，因有分枝生长的趋势而得名。本菌属的显著特性为：①细胞壁含有大量脂质；②无鞭毛、无芽胞，也不产生内、外毒素；③对人致病的主要有结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、麻风分枝杆菌；④所致感染多为慢性过程，长期迁延并有破坏性的组织病变。

实验难点
细胞壁含有大量脂质，主要是分枝菌酸，一般不易着色，若经加温或延长染色时间而着色后能抵抗强脱色剂盐酸乙醇的脱色，故又称抗酸杆菌，且不易破壁。

实验目的
将胞内分枝杆菌进行破壁，后续提取蛋白。

实验工艺
1.预处理：将灭活后的胞内分枝杆菌液体（非结核)分为两部分，一部分不作处理；一部分做碱处理，离心后去上清加水再重悬。
2.实验工艺：ATS破壁机搭配一级模块后，控低温处理。

实验结果
A.未处理的菌液破壁结果
通过对菌液进行抗酸染色后观察，破壁前菌液呈紫色，在破壁次数相同的条件下，随着压力的增高，胞内分枝杆菌颜色偏向蓝色。
 

100倍油镜显示，压力越高，破壁效果越好。（压力排序：A＜B＜C＜D）

破壁前

破壁后

B.碱处理菌液破壁结果
同压力同次数下，碱处理后的菌液破壁效果明显提高。

           （碱处理）                                              （未处理）

实验小结
1.从染色结果和显微镜观察结果可以看出，未处理的菌液经不同压力处理后，都有一定程度的细菌破壁，且压力越高，破壁效果越好。
2.碱处理有助于破壁，比同压力未处理的菌液破壁结果更好，细胞更细碎。